Через четыре года после поражения Чародейки Джокер расстается с Харли Квинн, выбрасывая ее на улицы Готэм-Сити. Ее приющает Док, владелец тайваньского ресторана, и она приходит в себя после разрыва отношений, обрезав волосы, заведя пятнистую гиену и занявшись роллер-дерби.
Харли напивается в ночном клубе, принадлежащем безжалостному криминальному авторитету Роману Сионису, и калечит его водителя после того, как тот оскорбляет ее. Она знакомится с бурлескной певицей Диной Лэнс, которая позже спасает пьяную Харли от попытки похищения. Впечатленный боевыми навыками Дины, Роман назначает ее своим новым водителем. На следующий вечер Харли снова напивается и, подслушав разговор своих собутыльников о том, действительно ли она рассталась с Джокером, взрывает завод Ace Chemicals, чтобы публично объявить о их расставании. Когда все узнают, что она больше не находится под защитой Джокера, Харли начинают преследовать все преступники, которые затаили на нее злобу.
Тем временем детектив GCPD Рене Монтойя расследует серию убийств, совершенных самоуправцем с арбалетом. Она пытается завербовать Дину в качестве информатора, но та отвергает предложение, поскольку GCPD не смог предотвратить смерть ее матери. Роман посылает Дину и своего садистского правую руку Виктора Зсаша, чтобы вернуть алмаз, в который вставлены номера счетов с состоянием преступной семьи Бертинелли, которая была убита много лет назад. Молодая карманница Кассандра «Касс» Кейн крадет алмаз у Зсаша и проглатывает его после ареста.
Харли, спасаясь от Монтойи и нескольких других, попадает в плен к людям Романа. Роман отправляет Харли на поиски алмаза под угрозой смерти, а также объявляет награду за поимку Касс. Ворвавшись в полицейский участок с гранатометом, заряженным краской и блестящими патронами, Харли освобождает Касс, и они вдвоем сбегают. Скрываясь в квартире Харли, они сближаются. Док получает запрос на информацию от «убийцы с арбалетом», которая оказывается Хеленой Бертинелли. Пережив резню своей семьи и пройдя обучение на наемного убийцу, Хелена преследует каждого из гангстеров, ответственных за убийство ее семьи, предпочитая прозвище «Охотница». Позже квартира Харли подвергается бомбардировке преступниками, ищущими Касс, и Док признается, что предал Харли. Харли звонит Роману и предлагает выдать ее в обмен на его защиту, соглашаясь встретиться в заброшенном парке развлечений. Дина сообщает Монтойе о встрече, но ее предательство замечает Зсас, который информирует Романа. Опустошенный Роман надевает свою ритуальную маску, от которой он получил свое прозвище «Черная маска».
В парке Монтойя сталкивается с Харли, но ее выбрасывают из окна. Прибывает Зсас, который усыпляет Харли, а затем держит Дину на мушке, но его убивает Хелена, которая раскрывает, что он был последним из убийц ее семьи. Монтойя возвращается и раскрывает, что Роман был истинным вдохновителем массового убийства Бертинелли. Он убил их, пытаясь заполучить алмаз. Начинается противостояние, пока они не понимают, что Роман прибыл с небольшой армией преступников в масках. Используя старое снаряжение Харли, импровизированная команда из пяти женщин выдерживает и отбивает атаку. Во время сражения Касс попадает в плен к Роману, а Дина раскрывает свою метачеловеческую способность кричать со сверхзвуковой скоростью, побеждая нескольких гангстеров. Харли бросается в погоню на роликовых коньках, и с помощью Хелены они вдвоем преследуют Романа. На ближайшем пирсе Роман готовится убить Касс, которая вытаскивает кольцо из гранаты, которую она взяла из ящика с оружием Харли. Харли сбрасывает его с пирса прямо перед взрывом гранаты, разрывая его на части и убивая.
После уничтожения преступной империи Романа Монтойя уходит из GCPD. Используя деньги со счетов, спрятанных внутри алмаза, Хелена присоединяется к Дине и Монтойе, чтобы создать команду мстителей под названием «Хищные птицы». Харли и Касс сбегают, продают алмаз в ломбард и начинают свой собственный бизнес.
